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文库构建的这些点,你get到了吗?

2017-09-01 安诺基因

众所周知,在测序之前都需要进行文库构建,但是为什么要进行文库构建?构建的文库结构各部分又有什么作用咧?不知道大家有没有思考过这些问题。其实文库构建是获得高质量的测序数据的关键步骤,把握好文库构建,测序就能成功一大半。下面就让小编来给大家进行详细解答~


文库构建的目的是在目的片段两端连接上想要的接头,文库结构需要符合Illumina上机要求才能进行测序。


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常规文库结构示例


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常规文库序列示例


P5和P7接头

将文库连接在Flow Cell上


Flow Cell(FC,流动槽)上固定有大量P5、P7寡核苷酸接头,它们通过共价键牢固地连接在FC上。通过扩增,文库片段通过P5和P7接头连接在FC上,不同的文库的P5和P7序列是相同的。

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Index—标签序列

数据拆分依据


常规的PE150测序1条lane产生的有效数据在120Gb以上,很少有一个样品需要测这么大的数据量,在测序时需要将多个文库样品混在同1条lane中,为了能够把测序数据按样本分离,在构建文库的时候,需要用不同index(标签序列)对文库进行标记。


Rd1 SP/Rd2 SP/index测序引物

Read1/Read2/index测序引物及其结合部分


在常规的双端测序中,先进行Read1测序,然后进行Index测序,最后Read2测序,测序前需要先杂交对应的测序引物。不同的建库试剂盒和建库方法,构建出的文库的测序引物可能不相同。Illumina平台的测序引物是多对测序引物的集合,也就是说是测序引物Mix,只要文库的测序引物能够与Mix中的一对引物匹配上就可以进行常规测序。如果文库的测序引物不能与Mix中的引物匹配上,在测序时就要添加特定的引物进行定制化引物测序。

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双端测序流程


DNA Insert

插入目的片段


PE150测序最佳文库插入片段大小为350bp,从测序的第1bp起测到的数据就是插入的目的片段序列,常规情况下不会测到接头序列,如果插入片段短于测序读长就会测到另一端的接头序列。

 

看了上面的解析,大家有没有对文库的结构了然于心,快快打包把样品送过来吧,我们这里有:

极速周期

常规项目,文库测序仅需7-15天。


出色的测序质量

测序数据产出和Q30均高于官方指标。

SE50 测序,平均Q30≥93%;

PE150 测序,平均Q30≥90%。


最优质的服务

安诺基因拥有超过80人的建库测序团队,具有丰富的建库和上机测序经验,为您提供高质量的数据,最短的周期,最优质的服务,满足您各类科研及应用的需求。


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