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       建库测序是指对合作伙伴提供的合格样品(DNA或RNA)进行文库构建或合作伙伴提供文库样品,文库质检合格后使用illumina高通量测序平台进行测序,进而产出高质量的测序数据。






HiSeq X Ten PE150测序

       HiSeq X Ten平台由10台HiSeq X超高通量测序仪组成,单次运行即可获得18Tb数据,首次打破了人类全基因组测序的1000美元门槛。生产通量强大高效,以其无可匹敌的速度和通量,为群体规模的人类全基因组测序提供了一个理想的方案。

  • 数据量

       以下统计了安诺近期的HiSeq X Ten PE150 300条lane数据产出,这300条lane的文库是碱基平衡文库,从数据统计结果可以看出,平均每条lane数据产出148.6 Gb,每条lane的数据产出大于130 Gb的比例是95.7%,远远超出Illumina官方指标。

  • 数据质量

       以下测序统计显示,HiSeq X Ten PE150测序数据平均Q30在90%以上,在碱基准确度、测序均一性、可用数据比例等方面均表现卓越。

以序列的碱基位置作为横坐标,每个位置的平均测序质量值作为纵坐标,得到下面的测序质量分布图:

 

以序列的碱基位置作为横坐标,以每个位置的ATCG碱基含量的比例作为纵坐标,得到碱基含量分布图,文库的碱基含量分布与建库,测序和物种相关。

NextSeq 550AR SE50测序

       NextSeq 550AR基因测序仪(国械注准:20173400330)是安诺优达与美国Illumina公司合作开发的新一代桌面式高通量基因测序仪,由安诺优达在中国进行研发生产、应用开发以及注册报批,该设备也是目前全球临床基因测序仪的最先进机型,为临床检测及科研项目提供了最佳选择。

  • 数据量

       以下统计了安诺近期的NextSeq 550AR SE50 50个FC(Flow Cell,流动槽)数据产出,从数据统计结果可以看出,平均每个FC数据产出415.9 M reads,远远超出Illumina官方指标。

  • 数据质量

       以下测序统计显示,NextSeq 550AR SE50测序数据Q30均在93%以上,测序快速高效。


QHiSeq X测序仪参数


AHiSeq X测序仪参数.jpg


Q文库样品测序有哪些注意事项?


A

(1)文库结构需符合Illumina上机要求;

2)对于合作伙伴自建库,请按照如下标准递送样本:

a. 为了防止样品丢失和转管带来的样品损失,需要将文库置于1.5ml离心管中存储,并用封口膜封好;

b. 文库体积需要多于10μl。



Q样品质检流程是怎样的?


A

(1DNA样品: Nanodrop® 2000 分光光度计检测 → Qubit® 3.0 Flurometer检测 → 琼脂糖凝胶电泳检测;

(2RNA样品: Nanodrop® 2000分光光度计检测→琼脂糖凝胶电泳检测→Agilent 2100检测;

(3文库样品: Agilent 2100检测 → StepOnePlus™ Real-Time PCR System检测。



Q文库的最适插入片段长度范围?


A文库的最适插入片段长度范围.jpg


Q文库pooling的原则


A不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求 pooling。


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