新鲜组织基因检出中位数可达5000以上/spot，FFPE样本可达6800以上/spot。

高于官方测试数据（以人脑为例），并且样本间可重复性较强。

表1 安诺基因部分样本测试数据结果

图1a 人肝脏样本

图1b 人脑样本

石蜡包埋样本

图1c 人脑样本

图1d 人肺样本

表2a 新鲜样本（标红为安诺新增自测样本）

表2b 石蜡包埋样本

、

图2 空间转录组分析思路

除了常规的标准分析外，安诺还可进行轨迹分析、细胞通讯分析、空间转录组与单细胞转录组联合分析等，所以你的样本准备好了吗，快来和安诺来一场“10X空转”的约会吧！

基因组组装技术的应用极大地推动了基础生命科学和医学研究领域的发展。传统的基因组组装策略由于忽略同源染色体之间的差异，不可避免的会遇到嵌合体基因组，无法区分同源染色体的等位基因表达的差异，同源染色体修饰差异等。为了打破这种局限性，单体型基因组组装技术顺势而生，现已成为高精确基因组组装和准确位点筛选的突破性技术。

为了深入地探究单体型基因组组装技术在物种进化、分子育种和遗传病研究上的应用，解析等位基因遗传表达机制和遗传调控机理，安诺优达推出单体型基因组组装技术，现已将此技术应用在多倍体、高杂合的基因组组装和人常染色体遗传病分子靶标筛选等领域。为了促进学术交流，加强新技术的应用，2022年6月18日安诺优达线上举办了“单体型基因组组装技术新品发布会”。

在本次新品发布会上，首先由安诺优达CEO李志民先生和PacBio中国区总经理吴应光先生进行了开场致辞，对基因组技术的发展创新，新产品的广泛应用及未来两公司的深入交流合作表达了高度期许。

新品发布环节中，安诺优达李营博士为大家分享了新产品的相关内容，三种单体型基因组组装方案及实测数据。安诺优达根据二倍体、四倍体的倍性差异和有无亲本数据分别提出ADPA、AUPPA和ATPA方案。

ADPA（有亲本二倍体单体型组装方案）是基于双亲本二代数据获取特异k-mer，并利用k-mer对HiFi序列进行分型，之后使用Hi-C挂载到染色体水平。除contig N50之外，单体型块的平均长度block N50也是重要评估指标，block N50越长越好，contig N50/block N50越接近1，分型准确性越高。安诺优达的实测数据表明，ADPA的block N50高于其他方法约18%-172%，虽然method A的block N50与ADPA接近，但是contig N50/block N50最低。

在解决部分物种难以获得准确的亲本序列的问题上，安诺优达提出AUPPA（无亲本二倍体单体型组装方案）：初步组装后，将序列回比获得SNP，利用SNP和Hi-C对组装后的contig进行分型，之后使用Hi-C挂载。安诺优达实测数据发现，AUPPA的block N50最高，超过其他三个方法11倍！AUPPA的contig N50/block N50和switch error也表现良好。

为了解决同源度高不易组装的问题，安诺优达开发了基于近缘二倍体物种的ATPA（同源四倍体单体型组装方案）分型方案：利用双亲本或研究物种的近缘二倍体物种的基因组，利用reads在基因组中的SNP信息对序列进行初步分型，结合深度信息再次对未分型数据再次分型后组装，然后使用Hi-C挂载，从而达到4套同源染色体的拆分。测试数据表明，高度同源四倍体的染色体间存在差异，等位基因形成模式仍然有待深入研究。

安诺优达实测数据表明，在获得高质量二倍体单体型基因组的方法上，ADPA最优，AUPPA次之。异源/同源四倍体都可以实现较好分型，但是近缘二倍体对同源四倍体分型（ATPA）是必需的。

新品发布环节结束后，进入了专家报告环节，由中国农业科学院作物科学研究所的周美亮研究员进行线上主持。

北京林业大学的钮世辉教授带来了题为《超大基因组装注释策略及面临的挑战》的报告分享。钮教授介绍了油松超大基因组组装注释过程中遇到的一些难题及解决方法，并表示油松基因组的组装象征着我们已经具备高质量组装任何超大基因组的能力。然而，针叶树基因结构注释比基因组组装有更大的挑战。其中主要原因是针叶树中具有大量超大内含子，平均长度是被子植物的20倍，也给基因结构注释带来了严峻挑战。最后，钮教授指出超大复杂基因组项目仍面临的一些挑战：多倍体物种复杂基因组的正确分型组装与基因注释等，不断发展的新测序技术和组装技术在解决这些关键问题上正发挥着越来越重要的作用。

中国科学院植物研究所的焦远年研究员带来了题为《被子植物基因组解析的进化研究》的报告分享。植物是陆地生态系统的主体，生物多样性是长期进化的产物。而被子植物类群物种丰富且多样性很高，被子植物的起源和快速分化是进化生物学家关注的热点问题，也是难点。焦远年研究员表示，多倍化是新性状起源、生物多样性形成以及作物驯化和改良的重要原因之一。焦远年研究员介绍了本人及团队主导并参与的陆地植物代表性物种的基因组测序和研究工作。焦远年研究员表示，基因组测序为植物进化、新性状起源、作物驯化和改良等提供了极其重要的数据基础；高质量基因组（单倍型、T2T、单细胞）将为更全面、更准确、更有趣的生命现象研究提供可能；越来越多的物种基因组解析可以让我们充分认识基因组进化特征和规律，进而理解物种进化的过程和未来发展；大数据时代下，进化研究也将真正深入到生命科学领域的各个研究方向。

广州医科大学附属第三医院的范勇研究员带来了题为《单细胞测序技术在生殖遗传领域的研究与应用》的报告分享。首先介绍辅助生殖技术面临的挑战，单细胞测序技术可以助力辅助生殖，在降低生殖缺陷，生殖和遗传相关疾病的筛查、诊断和治疗方面有非常重要的作用。接着介绍了单细胞测序技术在辅助生殖中的单基因病筛选、精子发生发育、胚胎单细胞转录组调控机制、胚胎单细胞表观修饰及着床发育等方向的成功研究应用案例。最后展望了单细胞测序技术未来在肿瘤、微生物、神经科学和免疫学中的应用前景。

华南农业大学的夏瑞教授带来了题为《岭南水果荔枝的起源和演化历史及开花调控》的报告分享。夏瑞教授结合多种测序技术和组装技术，获得了完整的 “妃子笑”荔枝基因组，大小为470 Mb，含有15条假染色体。后续利用改进的单倍型组装技术，获得了两套单独的单倍型基因组，并发现13,517对等位基因在不同组织中存在差异表达。极早熟荔枝种质倾向比对到一个单倍型基因组上，可能起源于云南野生荔枝群落；迟熟荔枝倾向比对到另一个单倍型上，起源于海南野生荔枝群落；而早熟荔枝则来源于极早熟荔枝和迟熟荔枝的杂交。对荔枝开花相关基因的分析发现，存在特异的基因扩增事件和COL基因3.7kb的序列缺失可能与荔枝花期调控有重要关系。关于荔枝基因组和驯化历史的结果将加速荔枝及其它相关无患子科植物的基础研究和遗传改良。

PacBio公司的资深生物信息科学家Wilson Cheng带来了题为《5-base HiFi Sequencing-Accuracy，Read Length & Methylation Calling》的报告分享。Wilson介绍了PacBio HiFi测序可通过检测酶动力学，在进行DNA测序时直接对碱基修饰进行检测。HiFi测序可检测DNA上的5mC甲基化修饰，无需特殊的文库制备流程，如重亚硫酸盐处理或特殊的分析流程。测试数据证明，HiFi测序的5mC检测与其它甲基化检测方法的结果高度一致，且通过HiFi 5mC 还能够获得单倍型的甲基化信息。此外，Wilson还向我们展示了HiFi数据在人类细胞系、人类罕见病、非人类脊椎动物和植物上检测5mC的优质表现。

中国中医科学院中药研究所的徐江副研究员带来了题为《药用生物分型基因组研究》的报告分享。药用生物是天然药物的主要来源。由于物种众多，基因组特性差异较大，对其基因组的解析构成挑战。徐江研究员分别以灵芝和黄花蒿为代表，介绍了不同方法在解决不同特性基因组分型过程中的应用。首先以灵芝为例，介绍了使用多种关键技术（PacBio+Bionano+Hi-C）解决灵芝单体型基因组装以及基于单体型对灵芝酸合成途径的解析；其次以黄花蒿为例，介绍了基于组装的两个株系4套单体型在青蒿素生物合成途径等问题的应用；徐江研究员认为灵活采用多种技术有助于基因组分型，单体型基因组的研究能够大大促进药用生物的解析，为药用生物产业的科学发展提供支撑。

最后中国海洋大学的包立随副教授带来了题为《单体型基因组与复杂性状的解析》的报告分享。变异与性状是生命科学领域中永恒的议题，探索并理解其互作关系是发育、进化、疾病研究中的核心问题。包立随教授分别从以下三个方面介绍了单体型基因组学应用在变异介导的复杂性状研究领域展现出的巨大潜力。首先是斑点叉尾鮰的适应性性状解析，讲述了单体型基因组组装在雌雄序列分型上的独有优势，以及在性染色体与性别决定基因的定位与进化研究中的应用；其次是扇贝的性染色体进化，通过8种主要扇贝科物种染色体水平组装解析了扇贝的性别决定基因等问题；最后以癌症的复杂结构变异为例，介绍了通过偶联复杂变异的单体型定相技术，可加深对染色体重排与癌症发生机制的理解。包立随教授通过上述三个研究案例，向大家梳理了单体型基因组技术的发展如何助力后基因组时代复杂性状的研究。

本次会议安诺优达提出的单体型组装方案可以实现准确且便捷的分型。未来，单体型组装技术可以更好地解决等位基因表达差异、染色体重排、单体型特异性插入等问题，并为加速基因编辑发展提供有效方案。我们期待未来安诺优达能够在基因组测序和组装技术上不断开拓和创新，加速推动基因组组装技术在生命科学和医学研究领域上的更广泛应用。

研究摘要

研究者对胰腺癌中通过三代技术鉴定到的染色质结构变异图谱进行了系统描述，重点研究了胰腺癌中的复杂染色质结构变异与高阶染色质构象变化之间的动态联系，发现了涉及两个胰腺癌关键驱动基因CDKN2A和SMAD4的大规模基因组结构重排，并从一维线性和三维互作角度阐明了它们对致癌基因MIR31HG、MYO5B等表达的影响。

染色体的结构和数量重排，统称为结构变异（Structural variation, SV），在很大程度上贡献了人类基因组的遗传多样性，与癌症遗传学、罕见病和进化遗传学有着高度的相关性。SVs不仅能影响基因的剂量，还能调节基因调控的基本机制。SVs可以改变调控元件的拷贝数，或通过破坏染色质的高阶组织（如拓扑关联结构域-TAD）来修改三维基因组。由于这些位置效应，SV可以影响远离SV断点的基因的表达，从而导致疾病。

胰腺癌是世界上最致命的恶性肿瘤之一，其中约90% 是起源于胰管上皮的胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC）。在解读基因组结构变异对胰腺癌潜在致病进展的研究中考虑SVs对3D基因组和基因表达调控的影响很有必要。

本研究选取了两株源自人胰腺导管上皮的胰腺癌细胞系（PANC1和 BxPC3）并选择永生化正常胰腺导管上皮细胞系（HPDE6C7）作为对照。

研究者在PDAC细胞系中鉴定到2万多SVs，其中多数SVs为插入和缺失突变（INS/DEL）。此外还对SVs在三维染色质结构Compartment、CDB（contact domain boundary）中的富集做了系统统计。

因为TAD边界的存在，TAD内的SV一般会将扰动范围限制在所在TAD区域内，Cross-CDB SVs对染色质高级结构的扰动范围将会至少涉及CDB两端的TAD。染色质拓扑结构域边界需要CTCF结合在相应的染色质位置，再综合cohesin等染色质结构蛋白形成。TAD边界DNA的缺失一般会引起TAD边界的消失，进而使消失边界两端的TAD发生融合现象。

本研究在胰腺癌中观察到了这个规律，Cross-CDB SVs相对于其他区域的SVs更显著的和TAD融合现象相关。例如PANC1中的一个Cross-CDB Deletion不仅涉及CDKN2A（多重肿瘤抑制基因）的缺失，而且造成了所在区CDB的消失和两端TAD的融合。在胰腺癌的发生机制的研究中一般会强调CDKN2A的lost所造成的影响，进一步分析发现大约 90% PDAC中的CDKN2A失活与其附近的MIR31HG表达的上调相关，这可能涉及CDKN2A 纯合缺失造成的相邻基因组区域TAD融合异常表达调控有关。研究者还观测到有些非纯合Cross-CDB SVs所涉及的CDB并未消失，这显示了生物学样本内的异质性。

近一半的胰腺导管癌有SMAD4蛋白表达缺失，研究者在BxPC3样本中发现了SMAD4所在基因组位置有一个大的缺失突变，反常的是缺失突变两端的DNA区的染色质交互几乎没有，按照常理缺失位置临近的两端区域之间的交互应该增强。作者对这个异常进行进一步研究发现，这里的Deletion还关联了chr18比较复杂的大规模染色结构质重排。这个染色质结构重排可能是由三处大的Deletion涉及的染色体碎裂引起。研究者利用Hi-C辅助基因组组装的相关原理模拟了chr18重排后的染色质排布。这提示了利用多种技术手段 （三代、Hi-C）综合分析染色质一维、三维结构的重要性。

此研究项目应用了安诺优达自主开发的多组学可视化软件Annoroad-OMIC-Viz（https://github.com/Spartanzhao/Annoroad-OMIC-Viz）。文章的部分分析代码上传到了github（https://github.com/Spartanzhao/code_for_Advanced_Science_pancreatic_cell_Line_Hi-C）。点击原文链接即可直接跳转到文章页面。

国家癌症中心、中国医学科学院肿瘤医院王成锋教授和军事医学研究院陈河兵副研究员为论文的共同通讯作者，中国医学科学院肿瘤医院胰胃外科主治医师杜永星、博士生顾宗廷和李宗泽为论文的共同第一作者，安诺优达基因科技公司为本研究提供了相应的技术支持。北京大学李程研究员和中国医学科学院基础医学研究所陈阳研究员给予了重要的指导和帮助。该研究得到了国家自然科学基金和中国医学科学院医学与健康科技创新工程的支持。

[1]l Yang Q, Jiang N, Zou H, Fan X, Liu T, Huang X, Wanggou S, Li X. Alterations in 3D chromatin organization contribute to tumorigenesis of EGFR-amplified glioblastoma[J]. Comput Struct Biotechnol J. 2022 Apr 8;20:1967-1978. doi: 10.1016/j.csbj.2022.04.007. PMID: 35521558; PMCID: PMC9062087.

[2]l Xia Y, Liu X, Mu W, Ma C, Wang L, Jiao Y, Cui B, Hu S, Gao Y, Liu T, Sun H, Zong S, Liu X, Zhao Y. Capturing 3D Chromatin Maps of Human Primary Monocytes: Insights From High-Resolution Hi-C[J]. Front Immunol. 2022 Mar 3;13:837336. doi: 10.3389/fimmu.2022.837336. PMID: 35309301; PMCID: PMC8927851.

[3]l Du Y, Gu Z, Li Z, Yuan Z, Zhao Y, Zheng X, Bo X, Chen H, Wang C. Dynamic Interplay between Structural Variations and 3D Genome Organization in Pancreatic Cancer[J]. Adv Sci (Weinh). 2022 May 15:e2200818. doi: 10.1002/advs.202200818. Epub ahead of print. PMID: 35570408.

针叶树在世界森林生态系统中占主导地位，是种植最广泛的树种之一。针叶树基因组属于大型基因组，存在高度重复序列(70%-80%)，因此基因组组装难度较高。

研究者利用PacBio测序、Hi-C辅助组装等技术，组装获得了25.4 Gb染色体水平的油松基因组。通过使用来自760个生物样本的大规模RNA-seq数据来辅助基因结构注释，揭示油松基因组扩展、生殖过程和适应性进化的多重基因组特征和分子机制，给针叶树进化研究提供了新思路，为今后进一步开展针叶树适应与发育研究提供了数据参考。

35年生无性系优良油松的新芽

DNA测序策略

Illumina NovaSeq 6000，DNA小片段文库，103 X

PacBio Sequel II基因组测序，103 X

Illumina NovaSeq 6000，Hi-C文库

RNA测序策略

Illumina测序，构建RNA文库

油松染色体基因组组装和注释

研究者首先通过Illumina测序，对油松基因组大小进行评估，随后利用PacBio测序数据进行自校正和组装，成功构建出24.4 Gb(96.1%，12条染色体）的油松高质量的染色体水平基因组。

针叶树中的基因通常多于二倍体被子植物，基因复制导致了许多基因家族的扩张。在基因复制的不同类别中，油松的旁系同源主要来源于分散重复(DSD)，很少来自全基因组复制(WGD)，油松发生近期全基因组复制事件概率较低。

图1 油松高质量基因组组装

长内含子的独特基因空间结构

油松的基因组存在大量的长内含子，总内含子/外显子长度与基因组的大小呈正相关，基因表达水平的差异与基因长度和内含子数有关。长基因的RNA剪接和DNA甲基化检测结果表明，几乎所有CG和CHG位点都发生了甲基化，DNA甲基化可能参与了长内含子的准确识别。

图2 油松基因组的基因空间结构和复杂性展示

油松的适应进化

通过功能富集分析发现了3,623个显著扩张的家族基因，主要参与生物和非生物胁迫反应。通过鉴定油松中的转录因子(TF)和转录调节因子(TR)家族，发现对低温高度敏感的AP2/ERF基因家族成员可能在油松的低温适应中发挥关键作用。在候选基因编码酶鉴定中，萜烯合成相关基因在不同树龄的油松中有明显的表达模式，新形成的针叶可能是萜烯的主要合成部位。

图3 油松中萜烯的合成途径

针叶树生殖发育的独特调控网络

被子植物中具有很多调节开花的关键基因，但油松中缺少很多同源基因。FT/TFL1-like基因是被子植物中调节开花的关键基因，但油松中仅有2个拷贝，但在其他针叶树中一般有4-6个拷贝。研究者在拟南芥中做了转基因验证，过表达了这两个基因，转基因植株表现出明显的晚开花表型。

通过对油松基因组中12个高表达的MADS-box基因的酵母双杂交检测，发现两个AGL6-like基因（PtDAL1和PtDAL14）在油松中有不同的表达模式，其中PtDAL14在生殖器官中特异性表达，与其他MADS-box转录因子蛋白相互作用，表明AGL6-like基因可能作为MADS-box转录因子之间相互作用的桥梁，从而形成互作网络。最后研究者提出了一个控制油松雌雄球果发育的模型，为今后针叶树生殖发育研究提供了一张蓝图。

图4 油松中12个MADS-box家族转录因子的表达及蛋白互作模型

油松近期的LTR-RT的爆发和稳定的甲基化维持系统

从染色体层面看，基因组甲基化水平与油松的TE覆盖率显著相关，研究发现携带TE的基因区域的平均甲基化水平远高于不携带TE的基因区域，但TSS和TES区域的平均甲基化水平始终较低。DNA甲基化对于TE基因组的扩张产生了影响，但未有证据表明，油松甲基化程度随树龄的增加而下降。LTR-RTs代表了大部分TEs，不平等重组（UR）是植物中一种重要的LTR-RT清除机制，针叶树的UR率可能比被子植物小型基因组低得多，SGS3-RDR6-RdDM通路可能是针叶树中主要的DNA甲基化途径。

图5 油松中DNA甲基化及转座子扩张

研究者构建了当前大型基因组中连续性最好的高质量染色体水平的油松基因组。研究发现转座子的不断扩张和缓慢清除是导致针叶树基因组巨大的重要原因，具有超长内含子的大基因往往表达水平较高。与被子植物相比，油松具有独特的生殖系统。油松基因组的构建为其独特适应性和发育研究、生殖生物学研究及基因组辅助育种进化和基因组学研究提供了重要参考。

作为国内基因组行业知名企业，安诺优达拥有实力强大的测序服务平台，配备系列先进仪器设备，三代PacBio（2台Sequel IIe+7台Sequel II+10台Sequel）为您的科研之路保驾护航；专业的生物信息分析团队，丰富的项目分析经验，让您的数据分析之途无忧。安诺基因已与中国农业大学、中科院遗传与发育所、中国海洋大学、中国农业科学院、福建农林大学等多家科研院所开展了深度合作，助力基因组文章发表于Cell、Nature、Nature Genetics、Nature Plants等多个国际高水平期刊。

参考文献

[1] Niu S.H., Li J., Bo W.H., Yang W.F., Zuccolo A.,Giacomello S., ChenX., Han F.X., Yang J.H., Song Y.T., Nie Y.M., Zhou B.,Wang P.Y., Zuo Q., Zhang H., Ma J.J., Wang J., Wang L.J., Zhu Q.Y., ZhaoH.H., Liu Z.M., Zhang X.M., Liu T., Pei S.R., Li Z.M., Hu Y., Yang Y.H., LiW.Z., Zan Y.J., Zhou L.H., Lin J.X., Yuan T.Q., Li W., Li Y., Wei H.R. & WuX.The Chinese pine genome and methylome unveil key features of coniferevolution[J]. Cell, 2022, 185(1):1-14.